Normal katpuls



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Normal katpuls var 300 slag i minuttet, og ingen kat havde tegn på kongestiv hjertesvigt, luftvejssygdom eller ortopædisk sygdom. Dyr havde adgang til mad og vand *ad libitum* og blev overvåget dagligt under hele proceduren. Dyrene blev bedøvet med en kombination af 3 mg/kg tiletamin/zolazepam, 3 mg/kg medetomidin og 2,5 mg/kg butorphanol (Zoletil, Vétoquinol, USA). Hver kat fik 0,5 mg/kg af en oxytetracyclinformulering med langsom frigivelse (20 % opløsning) som et topisk antibiotikum.

Efter induktionsproceduren blev dyrene anbragt i brystbenet, og huden på højre side af brystet blev præpareret med 70% isopropylalkohol og derefter 70% isopropylalkohol gennemvædet steril gaze. Tre separate 1 cm^2^ indsnit blev lavet med 3 cm fra hinanden på den forreste midtlinje af brystet. Alle snit var <,2 cm lange. Efter fjernelse af perikardialsækken blev de interkostale muskler skåret og hjertet blotlagt. En steril operationshandske blev brugt til at dække det ydre af hjertet, og hjertet blev forsigtigt eksteriøriseret. Hjertet blev holdt fladt, og hjertesækken blev fjernet fra de interkostale muskler, og fedt blev fjernet. Efter at hjertet var visualiseret, blev en enkelt injektion af 0,5 ml cephalothin (20 mg/ml, Tetrathol, Pfizer, New York, NY) indgivet i perikardialsækken under anvendelse af en tuberkulinsprøjte. På dette tidspunkt blev hjertesækken skåret i højre side af hjertet i fire 2 mm brede langsgående snit. Hjertet blev derefter eksterioriseret igen, og de forreste og laterale ventrikulære vægge og en eller begge atrievægge blev adskilt fra resten af ​​hjertet. Ventriklerne og atrierne blev forsigtigt trukket fra hinanden, og en anden påføring af cephalothin blev injiceret. Hjertet blev derefter ført tilbage til thoraxhulen, og huden blev syet.

Hjertekultur

----------------

Dyrkning af musehjerter blev udført som tidligere beskrevet ([@B16]). Kort fortalt blev hjerterne skåret ud, og de forreste og laterale ventrikulære vægge og en eller begge atrievægge blev adskilt fra resten af ​​hjertet. Individuelle ventrikler og atria blev derefter hver anbragt i 3 ml PBS, og deres endoteloverflader blev skrabet af. Ventrikulært væv blev hakket med en skalpel i <,1 mm^3^ stykker. Atrielt væv blev først skåret i tre 1--2 mm stykker og derefter hakket i mindre stykker. Både ventrikulært og atrielt væv blev homogeniseret i 10 s. Supernatanten af ​​homogenatet blev fjernet, og vævet blev centrifugeret ved 1.000 rpm i 3 minutter for at pelletere vævsrester. Supernatanten blev derefter fjernet, og vævet blev resuspenderet i PBS. Celleantal blev talt under anvendelse af et hæmocytometer og udpladet med 100.000 celler pr. brønd i en 96-brønds plade og fik lov til at klæbe natten over. Den næste dag blev vævet skiftet til lavt glukose DMEM (LG-DMEM) (Lonza, #12-604F), suppleret med 10% FBS og penicillin--streptomycin, som blev brugt til at erstatte FBS og penicillin--streptomycin af det oprindelige vækstmedie og dyrket ved 37°C i 5% CO~2~.

Flowcytometri

--------------

Blod blev opsamlet fra dyr under terminal anæstesi med isofluran, og dyrene blev efterfølgende perfunderet. Flowcytometri blev udført på blodprøver, enkeltcellesuspensioner fremstillet fra væv og cellekulturer. Til intracellulær farvning blev celler fikseret med 4% paraformaldehyd (PFA).

Flowcytometri blev udført under anvendelse af et BD FACS LSR II flowcytometer (BD Biosciences, #56612 og 56110) eller et MACSQuant flowcytometer (Miltenyi Biotec, #130-091-153). Cellesuspensioner blev farvet med monoklonale antistoffer mod CD3-PE-Cy7, CD3-V450, CD4-V500, CD8-FITC, TCRγδ-APC-Cy7 (R&,D Systems #FC-1002), CD3-PE, CD16/32 -V500, CD3-APC, CD4-Alexa700, CD8-FITC, CD45-V450, CD45-APC-Cy7, CD31-PE-Cy7 (Biolegend #110128, 101831, 101310, 116305, CD305, 81), CD16305, 81 -V450, CD4-FITC, CD8-PE-Cy7, CD49b-PE, CD11b-APC, F4/80-APC, Siglec-F-APC-Cy7 (eBioscience #17-4801-81), CD3-PE-Cy7 , CD4-FITC, CD8-FITC, CD19-APC-Cy7, CD11b-PE-Cy7, CD49b-APC, CD3-APC, CD8-APC (BD Biosciences, #553708, 555397, 557397, 553657, 8,5, 5,5 558402), CD49b-Alexa700, CD14-APC, CD16-PE-Cy7, CD44-APC, CD11b-Alexa700, CD3-PE-Cy7, CD11c-APC (Miltenyi, 130-093-238, 13091, 13091, 13091, 13091 -117-045), CD11b-FITC, CD11c-PE-Cy7 (BD Biosciences, #557657, 555849), CD3-Alexa700, CD8-PE-Cy7 (Biolegend #100722, 100731, 101301, 101301, 101301, 101301, 101302, 101302 , 101404), CD3-PerCP-Cy5.5, CD19-APC-Cy7 (eBioscience #17-0193-82, 17-0193-86), CD11b-APC, CD49b-APC-Cy7, CD49b-PE, CD14- APC-Cy7, CD14-PE- Cy7 (BD Biosciences, #557743, 555799, 557740, 557759, 557756, 557748), CD45-Alexa700, CD16-APC-Cy7 (Biolegend, #1093920, -FITC20, -FITC20, -FITC20, -FITC20, -FITC20, -FITC, Gr-10), -Cy7, CD11b-FITC, CD11b-APC, CD4-PE-Cy7 (BD Biosciences, #553835, 555404, 555404, 553827, 553821), CD62L-Alexa700, CD8-FITCC, CD4-FICCC, CD4-FICCC, CD4-FICC , CD62L-APC (Biolegend, #105315, 105308, 105402


Se videoen: Katpul Bazar Box Competition All Setup 2021Katpul Bazar Muharram Box Competition 2021


Forrige Artikel

Lukket øje

Næste Artikel

Om Ake, der kører sporvogn

Video, Sitemap-Video, Sitemap-Videos